Иммунохимические методы используются для выявления антигенов SARS-CoV-2 и антител к вирусу и дополняют комплекс клинических, инструментальных и лабораторных методов диагностики COVID-19 новой информацией, имеющей клиническое и эпидемиологическое значение.
К иммунохимическим относятся методы иммуноферментного анализа (ИФА), иммунохемилюминесценции (ИХЛ) и иммунохроматографии. Эффективность иммунохимических методов зависит от стадии инфекционного процесса, состояния иммунной системы пациента, а также от характеристик применяемых диагностических наборов.
Проведение иммунохимических исследований
Иммунохимические исследования для диагностики COVID-19 могут проводиться во всех лабораториях Российской Федерации вне зависимости от их организационно-правовой формы, имеющих санитарно-эпидемиологическое заключение о возможности проведения работ с возбудителями инфекционных заболеваний человека III — IV патогенности и условия для исследований с применением иммунохимических методов.
Для проведения исследования должны применяться зарегистрированные в установленном порядке на территории Российской Федерации диагностические наборы реагентов (тест-системы) в соответствии с инструкциями по их применению. Перечень зарегистрированных наборов реагентов представлен в Государственном реестре медицинских изделий.
Рекомендации по тестированию
С целью диагностики COVID-19 непрямым методом рекомендуется проведение раздельного тестирования на антитела класса IgM/IgA и IgG, а также мониторинг появления антител в динамике (детекция сероконверсии) — повторное тестирование в неясных случаях через 5 — 7 дней.
Для минимизации ложноположительных результатов рекомендуется ввести алгоритм последовательного тестирования пациентов, у которых получены первоначальные положительные результаты на антитела классов IgM/IgA или IgG, с использованием другого теста. С этой целью необходимо использовать тест-систему с максимальной чувствительностью и специфичностью, а также с одновременным выявлением антител классов A, M, G, которая будет играть роль референтной (верифицирующей) тест-системы.
Рекомендации по тестированию на антитела
Тестирование на антитела к вирусу SARS-Cov-2 рекомендуется использовать:
- в качестве дополнительного метода диагностики острой инфекции (с учетом серонегативного периода) или при невозможности исследования мазков МАНК, в том числе при госпитализации в стационар по поводу соматической патологии;
- для установления факта перенесенной ранее инфекции;
- для установления факта иммунного ответа на вакцинацию от COVID-19;
- для отбора потенциальных доноров иммунной плазмы.
Выявление антигенов SARS-CoV-2
Выявление антигенов SARS-CoV-2 проводится иммунохроматографическими методами (ИФА, ИХЛ или иммунохроматографии). Экспресс-тесты для определения антигенов (с применением иммунохроматографии) позволяют получить результат за 10 — 30 минут. Диагностическая чувствительность и специфичность экспресс-тестов на антиген SARS-CoV-2 могут быть ниже, чем у тестов на основе МАНК.
Положительные результаты тестов на антиген SARS-CoV-2 могут ожидаться в тот же период развития заболевания, что и выявление РНК вируса: за 2 дня до и на протяжении 5 — 7 дней после появления симптомов. Положительный результат теста может рассматриваться как подтверждение диагноза COVID-19, отрицательный результат не позволяет исключить COVID-19.
Иммунохроматографические тесты могут применяться для экспресс-диагностики COVID-19 в ситуациях, когда проведение молекулярно-генетического тестирования МАНК невозможно, в том числе в удаленных и малонаселенных регионах. Необходимо иметь в виду, что тест на антиген SARS-CoV-2 при малой распространенности заболевания имеет более низкую прогностическую ценность положительного результата.
Выявление антител к SARS-CoV-2
Выявление антител к SARS-CoV-2 проводится с помощью методов ИФА, ИХЛ или иммунохроматографии. Разработанные методы ИФА и ИХЛ позволяют получать качественные, полуколичественные (коэффициент позитивности) и количественные результаты. Для определения уровней иммуноглобулинов к SARS-CoV-2 необходимо использовать наборы реагентов для количественного определения антител, а результаты исследований представлять с использованием условных единиц измерения BAU/мл (binding antibody units, единицы связывающих анител).
Иммунохроматографические методы — быстрые диагностические тесты, рассматриваются как тесты у постели больного (время получения результата — 10 — 30 минут). Иммунохроматографические тесты являются качественными тестами и позволяют определить наличие антител к SARS-CoV-2 (IgM, IgG, суммарные антитела).
Фазы инфекционного процесса
С помощью выявления отдельных классов антител к SARS-CoV-2 (IgA/IgM, IgG) возможно определение различных фаз инфекционного процесса:
Серонегативная фаза: антитела могут не выявляться в первичном образце, но выявляются во взятых через несколько дней образцах;
Активная фаза: при определении диагностически значимого уровня IgA и/или IgM в одном образце или значимого нарастания уровня IgG в парных сыворотках, взятых с интервалом в 2 — 4 недели;
Фаза реконвалесценции: концентрация IgA и IgM, как правило, существенно снижается (падение титра в 2 — 4 раза) во время выздоровления, при сохраняющихся IgG через 2 недели после курса лечения и позднее;
Перенесенная инфекция: персистенция IgG без роста его уровня в парных сыворотках и отсутствие IgA и IgM.
Определение IgG к SARS-CoV-2 через 4 недели после вакцинации позволяет подтвердить наличие поствакцинального иммунитета. Длительность периода детектируемого наличия антител не определена, но в настоящее время рассматривается как период не менее 3 месяцев.
Сбор, хранение и транспортировка образцов биологического материала
Преаналитический этап
Биоматериалом для проведения иммунохимических исследований может быть капиллярная кровь, сыворотка, плазма, цельная венозная кровь (в зависимости от типа тестирования и согласно инструкциям производителей).
Забор крови проводят в соответствии с ГОСТ Р 53079.4-2008 Технологии лабораторные клинические. Обеспечение качества клинических лабораторных исследований. Часть 4. Правила ведения преаналитического этапа.
Пробирки с кровью транспортируют в термоконтейнерах с надписью: пробы крови для лабораторных исследований. В термоконтейнере должна поддерживаться температура от +4 до +8 °C. Пробы крови от лиц с установленным диагнозом COVID-19 помещают в дополнительный вторичный контейнер, затем — в термоконтейнер с надписью: пробы с инфицированным материалом.
Образцы крови должны быть доставлены в лабораторию в кратчайшие сроки. В журнале учета лабораторных исследований регистрируют время доставки проб в лабораторию.
Хранение образцов цельной крови допустимо при температуре 20 — 25 °C не более 2 часов, при температуре 2 — 8 °C — не более 6 ч с момента забора биоматериала.
Сроки хранения проб сыворотки при температуре 2 — 8 °C — не более 4 дней. Хранение проб сыворотки от 5 дней до 1 года осуществляют в замороженном виде при температуре не выше минус 18 °C. Длительное хранение проб (более года) осуществляется при температуре не выше минус 40 °C.
Аналитический этап
Аналитический этап проводится в соответствии с инструкцией к набору реагентов, который применяется для исследования.
Постаналитический этап
Оценка результатов иммунохимических исследований проводится в соответствии с инструкцией производителя применяемых медицинских изделий (тест-системы/набора реагентов и оборудования). Рекомендации по интерпретации результатов исследований приведены в таблице.
Интерпретация результатов исследований методами амплификации нуклеиновых кислот и иммунохимическими методами
| РНК | Антиген | IgM/IgA | IgG |
|---|---|---|---|
| — | — | — | — |
| + | + | — | — |
| + | + | + | — |
| + | + | + | + |
| — | — | + | + |
| — | — | — | + |
Интерпретация результатов иммунохимических исследований должна проводиться с учетом анамнеза и клинических данных, а также результатов других лабораторных и инструментальных исследований. Необходимо также учитывать вероятность получения ложноположительных и ложноотрицательных результатов.
Распространенные ошибки при диагностике COVID-19
Ложноположительные результаты могут возникнуть из-за перекрестно-реагирующих антител в крови пациента. Эти антитела имеют схожие иммунохимические свойства со специфическими антителами, что может привести к неточным результатам. Также, ложноотрицательные результаты могут быть получены при обследовании биологических образцов на ранних стадиях инфекции или при использовании менее чувствительных тест-систем.
ТИПИЧНАЯ СХЕМА МЕДИЦИНСКОЙ ПОМОЩИ ПАЦИЕНТАМ С ЛЕГКИМ ТЕЧЕНИЕМ COVID-19
Когда дело доходит до диагностики COVID-19, важно помнить об основных ошибках, которые могут возникнуть на различных этапах лабораторного исследования. Дезинфекция и обращение с отходами должны соответствовать стандартам, а проведение диагностики требует тщательной работы согласно протоколам.
Необходимые меры предосторожности
Особенно важно соблюдать правила безопасности при диагностике COVID-19, учитывая потенциальные риски ложноположительных и ложноотрицательных результатов. Правильное проведение лабораторных исследований на всех этапах и обработка образцов играют решающую роль в точности диагностики.
Помни, что правильная дезинфекция и обращение с отходами должны регулироваться соответствующими инструкциями для минимизации рисков передачи инфекции.
Обращение с пациентами
В условиях легкого течения заболевания COVID-19, оказание медицинской помощи требует четкой организации и следования установленным протоколам. Схема оказания помощи должна быть четко структурирована и учитывать специфику инфекции.
Помни, что к каждому пациенту необходимо подходить индивидуально, учитывая особенности его состояния и протекания болезни.
markdown